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無菌實驗室

1.無菌室的布局
1.1根據(jù)樣品檢驗要求，一般應至少包括更衣緩沖系統(tǒng)、微生物限度檢查室、無菌檢室、陽性菌室和物流通道。 

1.2更衣系統(tǒng)應至少包括一更（含更鞋）、二更（含洗手）、緩沖以及人流走廊等。

1.3物流通道應考慮凈污分流的布局，有條件的可設置污物走廊

2.無菌室的設計要求

2.1凈化級別：潔凈走廊、檢查室、陽性菌室應為一萬級；其他房間應為十萬級
2.2氣流組織：陽性菌室對走廊呈負壓，走廊對緩沖有5pa的正壓；陽性菌室全排風
2.3電氣控制：控制開關外置；設置通訊系統(tǒng)

3.結(jié)構(gòu)與要求：

無菌潔凈室不宜設在底層，防潮、防霉、采光好，遠離交通干道，廁所及污染區(qū)，面積不超過10m2，高 度 不  超 過 2.4m，由 兩個 緩 沖 間、操作間 組 成。操作間 緩 沖 間之 間應有樣品傳遞窗，出入操作間和緩沖間的門不應直對。無菌室內(nèi)應六面光滑平整，無縫隙，不起灰，不落塵，耐腐蝕，較易清洗，墻 壁 與 地 面、墻 壁 與 天花 板連 接 處應呈凹 弧 形，操 作間不得安裝下水道。

無菌室內(nèi)的照明燈應嵌裝在天花板內(nèi)，采光面積要大，光照應分布均勻，光照度不低于300 勒 克 斯。緩 沖 間和操作間應裝有紫外線殺菌燈（2－25w/m3）'用于空氣消毒。紫外線波長200－300nm者具有殺菌作用，其中以265－266nm殺菌作用較強，這與DNA的吸收光譜范圍一致，其殺菌機理可能是在細菌細胞DNA中引起胸腺嘧啶雙聚體形成，從而干擾細菌細胞DNA復制，導致細菌變異死亡。紫外線殺菌燈1m以內(nèi)距離殺菌效果較佳，每次開燈照射時間為30min。應定期檢查紫外線燈輻射強度，不得低于70μW·cm-21m距離。其缺點是穿透力弱，一張紙板可以阻礙光的透過，不能穿透固體物，故只能用作表面消毒及一些不耐熱或化學消毒劑物品的消毒。

4.溫度、濕度
無菌室內(nèi)溫度和相對濕度直接影響紫外殺菌燈的殺菌效果，故溫度較好控制在25±2℃，相對濕度40－60％。操作間或凈化工作臺的潔凈空氣應保持對環(huán)境形成正壓，不低于49Pa。

5.操作間
無菌室內(nèi)應安裝空氣除菌過濾層流裝置及調(diào)溫裝置。潔凈度要求：凈化工作臺潔凈度為100級，無菌室應為10000級。
操作間應準備乙醇燈（或煤氣燈），火柴，2％碘酊棉球及75％乙醇棉球、試管架、大小橡皮頭、砂輪、記號筆、無菌剪刀、鑷子、注射器等。微生物限度檢查無菌室操作間內(nèi)還應有電子稱（感覺為0.1g，較大稱量為300g為宜），電動勻漿儀等。

6.緩沖間 

緩 沖 間 內(nèi) 應 有 洗手盆，消毒液，無菌衣，帽，口 罩，拖 鞋 等，緩沖 間內(nèi) 不 應 放 置 培 養(yǎng) 箱 和 其他雜物。

（二）無菌室的使用 

1.在實驗開始之前1小時啟動風機系統(tǒng)（空調(diào)系統(tǒng)），并開啟空氣消毒裝置，消毒至少半小時后關閉

2.觀察并確保潔凈室的壓差
3.物品經(jīng)物流通道進入潔凈室
4.人員正確著裝后經(jīng)人流通道進入潔凈室
5.使用完畢，應用消毒液清潔工作臺面。實驗人員在更衣室換下無菌工作衣后出潔凈工作室。開啟空氣消毒裝置，消毒至少半小時后，關閉潔凈工作室的控制開關。

（三）無菌室的清潔維護

1.無菌室的清潔維護分為日常維護、定期維護和不符合時的維護。

2.日常維護由每次實驗的實驗人員進行，維護的范圍為進行實驗的潔凈工作室和輔助潔凈區(qū)，維護的頻率為每次實驗后。
3.定期維護由實驗室指定專人進行，維護的范圍為潔凈工作室，維護的頻率為每二周一次。
4.不符合時的維護由實驗人員進行，維護的范圍為不符合的潔凈室，維護的時機為出現(xiàn)不符合時

（四）無菌室的驗證
1.驗證的項目：潔凈度、微生物數(shù)、換氣次數(shù)、靜壓差、照度、溫度、相對濕度
2.驗證的技術要求

3. 驗證的周期   建議每半年一次，也可根據(jù)潔凈室的使用頻率適當增加驗證次數(shù)。
4. 驗證的方法   潔凈度和微生物數(shù)：采用GB/T16292~16294-1996，其他項目：參照JGJ71－90。
5. 驗證不符合項的處理
5.1當潔凈度、微生物數(shù)、換氣次數(shù)、靜壓差等指標出現(xiàn)不符合時，應停用潔凈室，對凈化系統(tǒng)進行調(diào)整后，在重新驗證，直至符合規(guī)定才能重新啟用潔凈室。